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一、 鏡檢法
取糞便加約十倍量之百分之○．五胰蛋白脢（Trypsin）溶液后置室溫三十至六十分離并偶而搖動(dòng)，促其消化，消化液經(jīng)紗布過濾，濾液以三千至四千轉(zhuǎn)（3000 -4000rpm）遠(yuǎn)心分離三十分鐘，取沉淀物作涂抹片標(biāo)本。再以抗酸性菌染色法（Ziehl-Neelsen 法）染色，鏡檢；或取直腸黏膜涂抹于玻片上，以抗酸性菌染色法（Auramine-0 法）染色六分鐘，再以百分之○．一高錳酸鉀液脫色制成染色標(biāo)本，以螢光顯微鏡鏡檢。
二、 培養(yǎng)法
取糞便一公克，加約四十公撮之百分之五草酸或百分之四氫氧化鈉溶液，混合均勻后，置于細(xì)長量筒中，靜置三至四分鐘，取上清液約十五公撮置于攝氏三十七度恒溫水槽內(nèi)三十分鐘，再以細(xì)目金屬網(wǎng)過濾，濾液以三千至五千轉(zhuǎn)（3000-5000rpm）遠(yuǎn)心分離三十分鐘，其沉渣與少數(shù)蒸餾水混合均勻后接種于副結(jié)核菌分離用培養(yǎng)基斜面，并以橡皮塞密封，置于攝氏三十七度恒溫箱中培養(yǎng)三個(gè)月。
取腸管洗去腸內(nèi)容物，以刀或玻片刮取腸黏膜，將腸黏膜或腸間膜淋巴結(jié)切細(xì)后，加十倍量之百分之○．五胰蛋白脢溶液，置室溫三十至六十分鐘，其沉渣加二至三倍之百分之四氫氧化鈉液混合后，接種于副結(jié)核菌分離用培養(yǎng)基斜面，并以橡皮塞密封，置于攝氏三十七度恒溫箱中培養(yǎng)三個(gè)月。
三、 副結(jié)核菌素皮內(nèi)注射法
以副結(jié)核菌素○．二毫升，注射于頸側(cè)皮內(nèi)，經(jīng)四十八小時(shí)，使用直徑測微尺測定注射局部之腫脹厚度與注射前同一局部厚度之差額，比較判定之。
四、 補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)
抗原：診斷用抗原以鎂生理食鹽水稀釋。
血清：供檢血清經(jīng)攝氏五十六度三十分鐘非動(dòng)化后以鎂生理食鹽水稀釋成五倍、十倍、二十倍.. ..。
紅血球：百分之三綿羊血球液。
溶血素：抗綿羊紅血球血清三單位。
補(bǔ)體：兩單位。
反應(yīng)溫度及時(shí)間：攝氏四至八度經(jīng)十八至二十四小時(shí)。
五、 綜合判定標(biāo)準(zhǔn)
陽性：
1. 臨床上呈現(xiàn)本病特有之征狀，如慢性頑固性下痢，營養(yǎng)不良，泌乳量降低等，且鏡檢法或培養(yǎng)法之結(jié)果呈抗酸性菌陽性者。
2. 皮內(nèi)注射反應(yīng)腫脹差在三公厘以上且補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)之血清稀釋倍數(shù)于十倍或高于十倍時(shí)，顯示百分之百阻止溶血者。
疑陽性：
1. 皮內(nèi)注射反應(yīng)腫脹差未達(dá)三公厘，且補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)之血清稀釋倍數(shù)于十倍或高于十倍時(shí)，顯示百分之百阻止溶血者。
2. 皮內(nèi)注射反應(yīng)腫脹差在四公厘以上，且補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)之血清稀釋倍數(shù)于五倍時(shí)，顯示百分之五十以下阻止溶血者。
3. 皮內(nèi)注射反應(yīng)腫脹差在三公厘以上，且補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)之血清稀釋倍數(shù)于五倍時(shí)，顯示百分之七五至百分之百阻止溶血者。
陰性：
1. 皮內(nèi)注射反應(yīng)腫脹差在三公厘以下，且補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)之血清稀釋倍數(shù)于五倍或五倍以下，顯示百分之五十以下阻止溶血者。
2. 皮內(nèi)注射反應(yīng)腫脹差在三公厘以上，四公厘以下，且補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)之血清稀釋倍數(shù)于五倍以下顯示百分之五十以下阻止溶血者。
六、 複檢
疑陽性者應(yīng)于初檢后三個(gè)月再複檢一次，其結(jié)果仍呈疑陽性或轉(zhuǎn)呈陽性者為陽性，轉(zhuǎn)為陰性者為陰性。
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